細(xì)胞學(xué)堂 | L-929細(xì)胞培養(yǎng)秘籍：新手也能輕松搞定！
L-929 細(xì)胞作為最早成功建立并得以廣泛應(yīng)用的永生化細(xì)胞系之一，在細(xì)胞生物學(xué)、病毒學(xué)、免疫學(xué)和毒理學(xué)等多個(gè)領(lǐng)域具有重要的研究價(jià)值。
本期細(xì)胞學(xué)堂將為大家詳細(xì)介紹L-929細(xì)胞的基本信息、培養(yǎng)過程中的注意事項(xiàng)，以及在巨噬細(xì)胞研究中的應(yīng)用，幫助您快速掌握培養(yǎng)細(xì)胞技巧，順利開展實(shí)驗(yàn)。
一、細(xì)胞背景
L-929細(xì)胞的全稱是NCTC clone 929，源自1948年，由WR. Earle等人從一只100天大的雄性C3H/An小鼠的皮下結(jié)締組織分離出成纖維細(xì)胞并建立[1]。在其名稱中，“L“代表該細(xì)胞組織來源于疏松結(jié)締組織（Loose Connective Tissue） ，“929”則是其建系時(shí)的編號。
L-929細(xì)胞的使用歷史悠久，在研究過程中衍生出了一系列的細(xì)胞，最常用的包括L-M[TK-]細(xì)胞、A9細(xì)胞、L Wnt-3A細(xì)胞以及L-WRN細(xì)胞等。
| 貨號 | 產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 規(guī)格 |
| CL-0137 | NCTC clone 929 [L cell, L-929]（小鼠成纖維細(xì)胞） | NCTC clone 929 [L cell, L-929] |
1×10^6Cells/T25 1×10^6Cells/Vial×2Vials |
| CM-0137 | L-929細(xì)胞專用培養(yǎng)基 | NCTC Clone 929 Cell Complete Medium | 125mL×4 |
二、細(xì)胞基本信息
別稱：NCTC-929L; L cell; Strain L-929; L929(NCTC); Clone 929; Earle's L cells等
生長特性：成纖維細(xì)胞樣，貼壁生長
倍增時(shí)間：28-36 h
培養(yǎng)條件：
MEM（含NEAA）+10% FBS+1% P/S
氣相：空氣，95% ；CO2，5%
溫度：37℃
換液頻率：2-3次/周
傳代比例：1:3-1:4
三、培養(yǎng)注意事項(xiàng)
• L-929細(xì)胞通常用10%的胎牛血清培養(yǎng)，但實(shí)際上，使用10%的馬血清也能滿足其正常生長需求。在這兩種血清的培養(yǎng)條件下，L-929細(xì)胞在形態(tài)和生長速度上未表現(xiàn)出明顯差異。
• L-929細(xì)胞具有很好的適應(yīng)性，能夠在不同類型的基礎(chǔ)培養(yǎng)基（如常見的DMEM、MEM以及RPMI-1640等）中生長。但需要注意的是，替換基礎(chǔ)培養(yǎng)基時(shí)需要經(jīng)過一定的適應(yīng)和馴化階段，以確保細(xì)胞能正常生長。
• L-929細(xì)胞對于血清非常敏感。當(dāng)血清質(zhì)量不佳時(shí)，細(xì)胞形態(tài)和生長狀態(tài)可能發(fā)生變化，例如變?yōu)閳A形（如圖1），或增殖速度變慢，甚至停滯。
圖1. L-929細(xì)胞正常生長形態(tài)和因血清質(zhì)量差導(dǎo)致細(xì)胞變圓
四、在巨噬細(xì)胞研究中的應(yīng)用
L-929細(xì)胞不僅在基礎(chǔ)細(xì)胞生物學(xué)中有廣泛應(yīng)用，還在免疫學(xué)和炎癥研究中發(fā)揮著重要作用。L-929細(xì)胞具備分泌巨噬細(xì)胞集落刺激因子（M-CSF）的能力，這一因子是誘導(dǎo)骨髓單核細(xì)胞分化為成熟巨噬細(xì)胞的關(guān)鍵因子。此外，L-929細(xì)胞還可分泌多種細(xì)胞因子，如MIF、CCL2、CCL7等，協(xié)同促進(jìn)巨噬細(xì)胞的分化和成熟[2]。使用L-929細(xì)胞條件培養(yǎng)基培養(yǎng)的巨噬細(xì)胞，生物學(xué)特性通常優(yōu)于直接提取的成熟巨噬細(xì)胞[3]，因此被廣泛應(yīng)用于免疫學(xué)和炎癥研究中。
L-929細(xì)胞條件培養(yǎng)基制備方法
a. 將L-929細(xì)胞接種于T75培養(yǎng)瓶，使用L-929細(xì)胞完全培養(yǎng)基培養(yǎng)7-10天；
b. 收集培養(yǎng)上清液，通過高速離心或過濾去除細(xì)胞碎片；
c. 將上清液分裝，存儲于-20℃或-80℃冷凍保存；
d. 使用時(shí)，按照20-30%的比例添加至含10%血清的完全培養(yǎng)基中。
L-929細(xì)胞在細(xì)胞生物學(xué)和免疫學(xué)研究中的廣泛應(yīng)用，使其成為研究者不可或缺的工具。在培養(yǎng)過程中，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件的適宜性以及血清質(zhì)量的穩(wěn)定性，能夠有效保證細(xì)胞的健康生長。此外，L-929細(xì)胞在巨噬細(xì)胞研究中的應(yīng)用，為免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)提供了有力支持。為幫助大家更好地開展相關(guān)實(shí)驗(yàn)，普諾賽提供了L-929細(xì)胞及其專用培養(yǎng)基，一站式培養(yǎng)細(xì)胞，助您科研無憂！
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參考文獻(xiàn)
[1] Katherine K. Sanford, Wilton R. Earle, Gwendolyn D. Likely. The Growth in Vitro of Single Isolated Tissue Cells. Journal of the National Cancer Institute, 1948 Dec; 9 (3):229-246.
[2] Heap RE, Marín-Rubio JL, Peltier J, et al. Proteomics characterisation of the L929 cell supernatant and its role in BMDM differentiation [J]. Life Science Alliance, 2021 Apr 14; 4(6):e202000957.
[3] Wang W, Qin Y, Wang YR, et al. Characteristic comparison of mouse primary macrophages cultured in L929 cell conditioned medium [J]. Chinese Journal of Biotechnology, 2020, 36(7): 1431-1439.
