Q1:怎么去除死細(xì)胞？

低速離心(800rpm，離心3mim)，主要是基于細(xì)胞密度和大小進(jìn)行分離，死細(xì)胞和碎片比較輕，會(huì)殘留在上清，活的細(xì)胞會(huì)留在離心管底部哈。這個(gè)可以去除大部分死細(xì)胞和碎片，但不能完全去除（會(huì)有少許殘留）。

Q2:有些細(xì)胞傳了幾代之后，突然出現(xiàn)了一些圓形的漂浮細(xì)胞，這是正常情況？

這個(gè)是正常的，細(xì)胞增殖是個(gè)動(dòng)態(tài)的過(guò)程，每個(gè)細(xì)胞所處的狀態(tài)不完全一樣，這種漂浮的細(xì)胞里面可能是增殖后還未來(lái)的及貼下去的，也可能是一些衰老細(xì)胞，我們每次傳代的操作多少會(huì)引起一些細(xì)胞損傷導(dǎo)致細(xì)胞貼壁性能減弱。只要整體細(xì)胞增殖情況正常，存在少量這種細(xì)胞，可以繼續(xù)培養(yǎng)觀察看看。

Q3:剛買回來(lái)的細(xì)胞傳多少代就凍存比較好？

建議細(xì)胞買回來(lái)擴(kuò)增1~2代后先凍存一管，一周后復(fù)蘇看下細(xì)胞活力，確認(rèn)細(xì)胞凍存條件合適后可以開(kāi)始大量?jī)龃妗?/p>

Q4:哪些因素會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞死亡？

有多種因素可能導(dǎo)致這種情況：
1. 二氧化碳濃度不正確:檢查設(shè)置以確保 CO2 水平設(shè)置為適合您的細(xì)胞系的水平（通常在 5% 到 10% 之間）；經(jīng)常檢查線路連接是否有泄漏，避免頻繁打開(kāi)和關(guān)閉培養(yǎng)箱門。
2. 培養(yǎng)箱中的溫度波動(dòng)：使用一個(gè)好用的溫度計(jì)在培養(yǎng)箱內(nèi)部監(jiān)測(cè)溫度。
3. 兩性霉素B或其他預(yù)防性抗生素/抗真菌藥物的濃度有毒：按照推薦的濃度使用。
4. 培養(yǎng)箱濕度不正確：檢查水盤中的水位，濕度對(duì)于許多細(xì)胞和培養(yǎng)基而言至關(guān)重要，通常我們需要保證培養(yǎng)箱時(shí)刻有水，也就是飽和濕度。
5. 培養(yǎng)基的滲透壓不正確：大多數(shù)哺乳動(dòng)物細(xì)胞可以耐受 260 至 350 mOsm/kg 的滲透壓，過(guò)量添加某些試劑和藥物可能會(huì)影響滲透壓。
6. 微生物污染：細(xì)菌和真菌污染通常很容易看到；支原體污染的癥狀比較難辨別，需要仔細(xì)監(jiān)測(cè)細(xì)胞形態(tài)并定期進(jìn)行檢測(cè)以及早發(fā)現(xiàn)污染。
7. 使用了不適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基：確認(rèn)所使用的培養(yǎng)基適用于您的細(xì)胞類型；需確認(rèn)是否含有血清及必須營(yíng)養(yǎng)成份、是否缺少某些微量元素成份、是否含有其他添加劑及藥物、培養(yǎng)基是否過(guò)效期、培養(yǎng)基保存方式是否得當(dāng)。

Q5:BV2細(xì)胞傳代培養(yǎng)時(shí)，發(fā)現(xiàn)細(xì)胞拉絲、觸角較多，如何調(diào)整？

BV2細(xì)胞以較低密度傳代后，容易出現(xiàn)拉絲、觸角較多的情況。這種情況可以先收集培養(yǎng)基中懸浮或貼壁不牢的細(xì)胞于15 mL離心管中，貼壁的細(xì)胞用胰酶消化1 min左右后終止消化，收集消化下來(lái)的的細(xì)胞（多觸角或者拉絲很長(zhǎng)的細(xì)胞，短時(shí)消化不容易消化下來(lái)，可以被篩掉），然后計(jì)數(shù)傳代，培養(yǎng)一段時(shí)間后細(xì)胞狀態(tài)會(huì)有好轉(zhuǎn)。沒(méi)有消化下來(lái)的細(xì)胞也可以提高細(xì)胞密度傳代，重復(fù)此步驟，收集偏圓形的細(xì)胞培養(yǎng)。

Q6:BV2細(xì)胞剛收到貨時(shí)，細(xì)胞整體偏圓形較多，而后續(xù)培養(yǎng)時(shí)梭形較多是怎么回事？

細(xì)胞形態(tài)會(huì)隨著密度的改變發(fā)生變化。BV2細(xì)胞增殖較快，到貨時(shí)由于運(yùn)輸震蕩的原因，部分細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)收縮，此時(shí)細(xì)胞密度較高，圓形相對(duì)較多；在后續(xù)培養(yǎng)中，按照1:2~1:4傳代24 h時(shí)，細(xì)胞主要以梭形為主；后續(xù)隨著細(xì)胞密度越來(lái)越高，圓形細(xì)胞會(huì)逐漸變多。

Q7:BV2細(xì)胞形態(tài)變?yōu)榘⒚装蜆?/h4>

小膠質(zhì)細(xì)胞是一種可塑性極高的細(xì)胞，可通過(guò)特定因素激活，從而發(fā)揮其免疫功能。從靜息態(tài)變?yōu)榧せ顟B(tài)的過(guò)程中，小膠質(zhì)細(xì)胞形態(tài)也隨之發(fā)生改變。 實(shí)驗(yàn)中常用細(xì)菌脂多糖（LPS）和干擾素-γ（IFNγ），分別模擬細(xì)菌和病毒感染，來(lái)刺激小膠質(zhì)細(xì)胞激活。受到刺激的小膠質(zhì)細(xì)胞突起縮短變厚，胞體增大，呈現(xiàn)阿米巴樣（如下圖所示）。 但有的時(shí)候BV2形態(tài)變化并不明顯，還需要結(jié)合其他實(shí)驗(yàn)，如檢測(cè)NO、IL-13等炎癥因子的表達(dá)，來(lái)確定BV2是否被定向激活。

Q8:BV2細(xì)胞形態(tài)的問(wèn)題：培養(yǎng)過(guò)程梭型細(xì)胞比圓形細(xì)胞多，梭型是不是細(xì)胞分化了？

細(xì)胞受到LPS刺激后易分化，而常規(guī)培養(yǎng)過(guò)程是不會(huì)自發(fā)分化的。關(guān)于哪種形態(tài)是分化，并沒(méi)有統(tǒng)一的定論，有的文獻(xiàn)描述分化細(xì)胞是長(zhǎng)梭型細(xì)胞增加，有的文獻(xiàn)稱分化細(xì)胞偏圓形，建議通過(guò)檢測(cè)相關(guān)的指標(biāo)變化來(lái)判斷是否分化。 該細(xì)胞在培養(yǎng)時(shí)，高密度下貼壁的細(xì)胞形態(tài)會(huì)偏圓形，低密度下貼壁細(xì)胞形態(tài)會(huì)偏長(zhǎng)條形。密度比較高的時(shí)候，漂浮的細(xì)胞會(huì)聚團(tuán)。存在圓形和梭形兩種細(xì)胞形態(tài)。

Q9:BV2細(xì)胞是激活態(tài)還是靜息態(tài)？

在基礎(chǔ)培養(yǎng)條件下，BV2細(xì)胞通常處于靜息狀態(tài)，也可以根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求，調(diào)控BV2為靜息狀態(tài)或激活狀態(tài)。BV2是一種半貼壁半懸浮細(xì)胞，它的形態(tài)并不規(guī)則，存在圓形和梭形兩種，有的文獻(xiàn)中說(shuō)梭型的細(xì)胞是極化的，有的文獻(xiàn)中說(shuō)圓形的細(xì)胞是極化的，但是在實(shí)際培養(yǎng)過(guò)程中，圓形和梭型細(xì)胞并沒(méi)有一個(gè)特定比例，判斷哪種形態(tài)的細(xì)胞是激活態(tài)和靜息態(tài)，無(wú)法通過(guò)形態(tài)辨認(rèn)，細(xì)胞是否被定向激活，需要結(jié)合實(shí)驗(yàn)來(lái)檢測(cè)相關(guān)指標(biāo)的表達(dá)情況，如NO、IL-13等炎癥因子的表達(dá)。 可以通過(guò)添加特定的誘導(dǎo)物（如LPS、IFN-γ等），以誘導(dǎo)其進(jìn)入激活狀態(tài)。

Q10:BV2用MEM培養(yǎng)可以嗎？

可以的，這個(gè)細(xì)胞有兩種培養(yǎng)條件，DEME和MEM，所以使用MEM培養(yǎng)BV2細(xì)胞是可行的，但需要確保培養(yǎng)基中含有足夠的營(yíng)養(yǎng)成分，如血清和其他補(bǔ)充物。如果在使用MEM過(guò)程中遇到生長(zhǎng)緩慢或細(xì)胞狀態(tài)不佳的問(wèn)題，可以考慮調(diào)整培養(yǎng)基成分或改為使用DMEM。通過(guò)仔細(xì)觀察和記錄細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)并根據(jù)需要調(diào)整培養(yǎng)條件，可以確保BV2細(xì)胞在DEME或MEM培養(yǎng)基中的良好生長(zhǎng)。