普諾賽®肝臟類原代細胞分離培養(yǎng)試劑盒—多類型肝臟細胞精準(zhǔn)分離

原代細胞的體外分離與培養(yǎng)技術(shù)對于揭示生理和病理機制至關(guān)重要，其生物學(xué)特性更貼近體內(nèi)真實狀態(tài)，為研究提供可靠的實驗?zāi)Ｐ汀ａ槍δX、血管、肝臟、軟骨、骨髓和心臟六大類組織，普諾賽®推出一系列高效、便捷的原代細胞分離培養(yǎng)試劑盒，助力科研人員突破細胞分離難點，獲取高純度、高活性的細胞資源。本期細胞學(xué)堂，我們將詳細介紹肝臟類原代細胞分離培養(yǎng)試劑盒，助您輕松獲得高純度、高活性細胞，順利開展相關(guān)細胞研究。

一、可提取細胞類型及研究應(yīng)用

肝臟是一個由多種功能細胞協(xié)同構(gòu)成的復(fù)雜器官，這些細胞在物質(zhì)代謝、免疫應(yīng)答及組織修復(fù)中發(fā)揮關(guān)鍵作用。研究中常涉及的肝臟細胞主要包括肝實質(zhì)細胞和非實質(zhì)細胞兩大類。

1、肝實質(zhì)細胞

肝實質(zhì)細胞是肝臟中的主要代謝功能細胞，構(gòu)成了肝實質(zhì)的核心成分。這些細胞體積較大，形態(tài)通常呈圓形，部分細胞具有明顯的雙核結(jié)構(gòu)。它們主要參與肝臟代謝、解毒和膽汁分泌等關(guān)鍵功能，是研究肝臟病理生理過程（如代謝紊亂、脂肪肝等）的主要對象。

2、肝非實質(zhì)細胞

肝非實質(zhì)細胞雖然不直接承擔(dān)肝臟的核心代謝功能，但它們通過免疫調(diào)控、組織支持和微環(huán)境維持等方式參與代謝相關(guān)的穩(wěn)態(tài)調(diào)控，主要包括以下三類：

肝星狀細胞：占非實質(zhì)細胞的30%左右，分布于Disse間腔（肝血竇與肝細胞之間）中。在正常肝臟中，這些細胞處于靜止?fàn)顟B(tài)，主要功能是貯藏維生素A。當(dāng)肝臟受到損傷或炎癥刺激時，星狀細胞被激活，表現(xiàn)出成肌纖維細胞樣表型，參與組織修復(fù)及纖維化調(diào)控。其研究多集中在肝纖維化和肝再生微環(huán)境調(diào)控機制。

肝枯否細胞：作為肝臟中常駐的巨噬細胞，主要分布于肝血竇內(nèi)，具有吞噬異物、清除衰老細胞及病原體的作用，是介導(dǎo)肝臟免疫反應(yīng)的主要細胞。研究方向涉及感染免疫、炎癥-纖維化轉(zhuǎn)化等肝臟疾病。

肝竇內(nèi)皮細胞：具有獨特的有孔結(jié)構(gòu)，缺乏完整的基底膜，構(gòu)成了血液與肝實質(zhì)細胞之間的高通透性屏障。這些細胞通過調(diào)控物質(zhì)（如氧氣、激素、代謝產(chǎn)物）交換與跨膜轉(zhuǎn)運，在維持肝臟微循環(huán)和組織穩(wěn)態(tài)中發(fā)揮重要作用。研究方向主要包括肝竇微循環(huán)障礙、肝病微環(huán)境調(diào)控及物質(zhì)跨膜運輸機制。

二、普諾賽®肝臟類原代細胞分離培養(yǎng)試劑盒

產(chǎn)品目錄

肝臟類原代細胞分離培養(yǎng)試劑盒組分及用途簡述

清洗液：用于清洗肝臟組織；提供液體環(huán)境以浸潤組織和細胞，同時具有一定的抑菌作用。

分離液：利用細胞密度差異，采用密度梯度離心法，使細胞按照密度在離心管中分層分布，從而達到分離純化的目的。

消化酶與酶稀釋液：按比例配制后，可酶解組織中細胞外基質(zhì)中的連接蛋白質(zhì)，使組織解離為單細胞懸液。

基礎(chǔ)培養(yǎng)基與添加劑：為細胞提供必需的養(yǎng)分和生長環(huán)境，添加劑可促進目標(biāo)細胞的優(yōu)先生長。

細胞濾網(wǎng)：用于過濾雜質(zhì)和未完全消化的組織碎片，提高目標(biāo)細胞純度。

前灌注液（肝實質(zhì)細胞）：用于清除肝臟內(nèi)的血液，抑制依賴鈣鎂離子的連接，為后續(xù)灌流提供條件。

試劑盒提取細胞圖展示（部分）

	形態(tài)觀察	免疫熒光鑒定
小鼠肝實質(zhì)細胞 （CK-18）
大鼠肝竇內(nèi)皮細胞 （CD31）

采用普諾賽®試劑盒分離的肝臟類原代細胞展現(xiàn)出優(yōu)異的實驗特性：細胞貼壁良好，具有典型的細胞形態(tài)學(xué)特征，狀態(tài)穩(wěn)定，目標(biāo)細胞的特異性標(biāo)志物呈陽性表達，純度可達90%以上。該試劑盒分離的細胞，實驗重復(fù)性和結(jié)果一致性良好，適用于后續(xù)實驗操作。

三、肝臟類細胞提取與培養(yǎng)常見問題整理

1、肝實質(zhì)細胞灌流操作困難、活性低怎么辦？

建議使用正常大鼠用PBS進行模擬灌流操作，至少成功完成2次以上模擬實驗后再開展正式實驗。

2、肝臟類細胞都需要使用到分離液分離純化細胞，有什么注意事項？

使用分離液時，應(yīng)確保懸液和下層分離液形成清晰分層。分層不清會影響實驗結(jié)果。若無法確保兩種分離液形成分層，建議先用小量程的移液槍將少量液體平鋪在下方液面上方，再換用大量程移液槍（必要時使用注射器）。

3、實驗鼠齡有限制嗎？

不同肝臟細胞對鼠齡敏感性不同，建議嚴(yán)格按照試劑盒說明書推薦的鼠齡和數(shù)量：

A. 肝竇內(nèi)皮和肝枯否細胞分離培養(yǎng)試劑盒適用于2-12日齡的小鼠或大鼠（若獲取肝組織量太少，可增加動物數(shù)量）。

B. 肝星狀細胞分離提取培養(yǎng)盒適用于1-2日齡新生大鼠。

C. 肝實質(zhì)細胞分離提取培養(yǎng)盒建議選用4-12周齡的小鼠和2-8周齡大鼠。

4、肝實質(zhì)灌流效果總是不理想？如何解決？

若灌流速率正確但灌流效果差，多因扎針和固定失誤導(dǎo)致。建議加強扎針與灌流操作練習(xí)。

5、肝竇內(nèi)皮和肝枯否細胞出現(xiàn)混合污染，如何解決？

這兩種細胞分離流程相似，容易混合污染。可根據(jù)肝枯否細胞貼壁快、消化難度高及營養(yǎng)需求低于肝竇內(nèi)皮細胞的特點，采用差速貼壁、差速消化法進行純化。

6、肝竇內(nèi)皮和枯否細胞消化不完全/過度是什么原因?qū)е碌模瑫a(chǎn)生什么影響？

消化不完全可能由于取材量過大、組織無充分剪碎、離心管直立導(dǎo)致酶接觸面少等。過度消化可能由低溫消化時間過久導(dǎo)致。兩者情況均會影響細胞的數(shù)量和純度，應(yīng)嚴(yán)格按照說明書操作。

7、肝臟類細胞能傳代嗎？最多能傳幾代？

不同的細胞傳代代數(shù)各不相同：

A. 肝實質(zhì)細胞不可消化和傳代，嚴(yán)禁使用各種消化酶處理。

B. 肝星狀細胞可用胰酶消化，體外可傳3代左右。

C. 肝竇內(nèi)皮細胞用胰酶消化，大鼠來源細胞可傳2-3代，小鼠來源細胞只有1-2代。

D. 肝枯否細胞基本不增殖，使用胰酶消化難度高（需酶解5min以上），長時間消化對細胞活性會產(chǎn)生較大影響，不建議消化傳代。

8、細胞懸液經(jīng)分離液分離后，在目的層無細胞怎么回事？

目的層無細胞可能是組織消化不充分、細胞量少、死細胞比例過高導(dǎo)致的，表示實驗失敗。

9、不同肝臟細胞培養(yǎng)時限是多久？

A. 肝實質(zhì)細胞一般在第一天呈現(xiàn)典型形態(tài)，第2天后便會逐漸去分化，可培養(yǎng)10天以上，但建議3天內(nèi)完成實驗。

B. 枯否和肝竇內(nèi)皮細胞大概能培養(yǎng)1-2周。

C. 星狀細胞可培養(yǎng)2周左右。

以上是關(guān)于肝臟類原代細胞分離培養(yǎng)試劑盒介紹及細胞提取常見問題分析。后續(xù)小普還將帶來普諾賽®心臟、骨髓、軟骨類原代細胞分離培養(yǎng)試劑盒的精彩內(nèi)容~

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