細(xì)胞學(xué)堂 | Caco-2細(xì)胞生長(zhǎng)特性和常見(jiàn)問(wèn)題解決策略

Caco-2 (人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞)分離自一位72歲男性直腸原位癌，人結(jié)腸癌Caco-2細(xì)胞系在標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)條件下匯合后，自發(fā)分化為腸上皮樣細(xì)胞，是常用的腸癌細(xì)胞模型。

本文為大家介紹Caco-2細(xì)胞生長(zhǎng)特性和常見(jiàn)問(wèn)題解決策略。

生長(zhǎng)特性

呈島狀生長(zhǎng)

Caco-2細(xì)胞群的邊界光滑，視野中一個(gè)個(gè)細(xì)胞克隆如同海上小島一般。

空泡多

Caco-2細(xì)胞群中常常含有巨大的空泡，這是細(xì)胞本身的特性，屬于正?，F(xiàn)象。

難消化

Caco-2細(xì)胞與細(xì)胞間連接緊密，使得細(xì)胞難以解離。通常加入胰酶后，細(xì)胞克隆的四周先飄起來(lái)，中間仍貼壁；隨后整片克隆脫落，但細(xì)胞與細(xì)胞間不會(huì)分散。消化時(shí)間為5-10分鐘，該細(xì)胞難以被吹散為單個(gè)細(xì)胞，當(dāng)細(xì)胞能夠被吹散為小的細(xì)胞團(tuán)塊，即可終止消化。

貼壁慢

Caco-2貼壁緩慢，在標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)條件【MEM（含NEAA）＋20% FBS＋1% P/S】下，接種后約24~72小時(shí)完成貼壁。推薦接種后第三天再換液。

生長(zhǎng)慢

Caco-2細(xì)胞傳代周期較長(zhǎng)，這是因?yàn)镃aco-2貼壁和生長(zhǎng)都較為緩慢。按1:4傳代的情況下，約一周傳代一次。

常見(jiàn)問(wèn)題

細(xì)胞不貼壁怎么辦？

Caco-2細(xì)胞培養(yǎng)基里添加的胎牛血清比例為20%，當(dāng)血清比例降低，貼壁性下降時(shí)，補(bǔ)充胎牛血清至20%，繼續(xù)培養(yǎng)1-2天，細(xì)胞即可貼壁。檢查培養(yǎng)基是否偏堿（呈紫紅色），偏堿的培養(yǎng)基可能導(dǎo)致細(xì)胞無(wú)法貼壁。

能否用DMEM培養(yǎng)基替代MEM培養(yǎng)基？

可以。DMEM（Dulbecco's Modified Eagle Medium）是在MEM培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上研制的。Caco-2細(xì)胞在DMEM+20%FBS+1%P/S條件下生長(zhǎng)狀態(tài)正常。

MEM中不含NEAA會(huì)怎樣？

當(dāng)使用不含NEAA的MEM培養(yǎng)基時(shí)，Caco-2生長(zhǎng)速度可能下降，漂浮細(xì)胞增多。

細(xì)胞消化不下來(lái)怎么辦？

如果消化5-10分鐘，細(xì)胞部分脫落，另一部分仍然貼壁緊密，可以將脫落細(xì)胞轉(zhuǎn)移至離心管，向原瓶中加入新的胰酶，放入培養(yǎng)箱繼續(xù)消化剩余細(xì)胞，每隔1min拿出來(lái)觀察，直到細(xì)胞滑落。

漂浮細(xì)胞多怎么辦？

有少量發(fā)亮的細(xì)胞漂浮或黏附在細(xì)胞克隆上，是正常的，隨后會(huì)進(jìn)入克隆并正常生長(zhǎng)。所以避免頻繁觀察細(xì)胞，可以減少漂浮細(xì)胞產(chǎn)生。

如果Caco-2細(xì)胞隨著培養(yǎng)過(guò)程，漂浮得越來(lái)越嚴(yán)重，甚至大塊兒飄起，就要檢查培養(yǎng)基成分、培養(yǎng)環(huán)境是否出現(xiàn)異常了。

注意事項(xiàng)

1、Caco-2細(xì)胞貼壁慢特別是剛復(fù)蘇時(shí)，一般2-3天貼壁    展開(kāi)，會(huì)有空泡。

2、Caco-2細(xì)胞在傳代細(xì)胞中，注意消化散，否則難以貼壁。

3、成團(tuán)生長(zhǎng)，Caco-2細(xì)胞密度越大，表面空泡黑點(diǎn)越多。

4、一般Caco-2細(xì)胞長(zhǎng)至80%傳代，細(xì)胞成片，其實(shí)密度很大。

5、Caco-2細(xì)胞生長(zhǎng)太滿對(duì)細(xì)胞狀態(tài)影響嚴(yán)重，傳代后易碎，死亡。

6、Caco-2細(xì)胞生長(zhǎng)時(shí)間越長(zhǎng)，消化時(shí)間越長(zhǎng)。

基本資料