細胞學堂 | 骨髓來源樹突狀細胞（DC細胞）怎么養(yǎng)
樹突狀細胞(dendriticcells, DC)，因其表面具有偽足樣或樹枝狀突起而得名,它是體內最廣泛的專職抗原遞呈細胞( antigen presenting cells,APC) , 具有強大的激活初始T細胞, 激發(fā)初次免疫應答的獨特功效。
DC細胞在體內含量甚微, 這極大地限制了DC的研究和應用。但DC能從不同組織里的DC前體細胞分化、誘導而來, 如骨髓、外周血、臍血中培養(yǎng)出來。
DC不僅能誘導免疫反應, 還具有誘導免疫耐受的特性。根據發(fā)育成熟狀態(tài)，將DC分為未成熟DC (immatureDC, im-DC)、成熟DC (matureDC, mDC)和半成熟DC(semi-matureDC, smDC) 。DC表達特異性表面標志OX62, 高表達MHCII、CD80、CD86。成熟的DC具有明顯刺激同種異體T細胞增殖的能力。
本文所述內容，適用于小鼠骨髓來源樹突狀細胞(DC細胞)和大鼠骨髓來源樹突狀細胞(DC細胞)。
提取方法
取大腿，沖洗骨髓，得到骨髓細胞懸液, 經密度梯度離心得到骨髓單個核細胞。
誘導方法
應用重組粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子(GM-CSF)、重組白細胞介素-4 (IL-4)誘導，可以得到未成熟的DC細胞， 再加入重組腫瘤壞死因子-α(TNF-α) 進行體外誘導培養(yǎng)，可以得到成熟的DC細胞。
標準形態(tài)
成熟的DC細胞形態(tài)多樣。細胞表面伸出樹枝樣突起, 形態(tài)不規(guī)則,長短及粗細不一, 細胞形態(tài)有的呈葉狀, 有的呈星狀, 細胞大而透亮。
小鼠骨髓來源樹突狀細胞(DC細胞)（100X）
小鼠骨髓來源樹突狀細胞(DC細胞)（200X）
培養(yǎng)注意事項
DC的培養(yǎng)時間較長, DC逐漸由貼壁生長變成半懸浮, 懸浮狀態(tài)生長。當DC開始半懸浮及懸浮生長后, 換液時吸走的培養(yǎng)液中會帶走一定量的DC, 可將其離心后，再置于培養(yǎng)液中繼續(xù)培養(yǎng), 避免DC的損失浪費。
DC細胞為不增殖細胞群，建議收貨一周內做實驗為最佳。
收貨處理方法
收到細胞后，請按照以下方法進行操作：
1、取出T25細胞培養(yǎng)瓶，用75%酒精消毒瓶身；
2、拆下封口膜，放入37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h，以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
3、將T25細胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基吸出轉移至50ml離心管中，經1200-1500rpm離心3min，棄上清，收集細胞沉淀；
4、用新鮮培養(yǎng)基輕輕吹打混勻細胞沉淀，轉入原瓶中繼續(xù)培養(yǎng)，procell寄送的培養(yǎng)瓶使用的是不透氣瓶蓋，需要擰松瓶蓋讓細胞透氣。
5、DC細胞為不增殖細胞群，如果您的實驗還未準備好，建議您每3天換液一次即可，換液時注意將舊培養(yǎng)基離心收集細胞后放回原瓶繼續(xù)培養(yǎng)。
6、普諾賽建議您收貨后一周內做實驗，避免細胞培養(yǎng)時間過長影響狀態(tài)以及后續(xù)試驗結果。
半貼壁半懸浮細胞消化處理方法
如您的細胞在做實驗前需要消化后轉移到孔板或者其他器皿，可按照如下操作進行：
1、吸出舊培養(yǎng)基轉移至離心管中，用PBS沖洗2遍，將沖洗的PBS也轉入離心管中一起離心，經1200-1500rpm離心3min，棄上清，收集細胞沉淀①；
2、添加0.25%胰蛋白酶消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中，輕微轉動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后，吸出多余胰蛋白酶消化液，37℃溫浴1-3min；倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后，再加入5ml完全培養(yǎng)基終止消化；
3、用吸管輕輕吹打混勻，收集細胞懸液至離心管中；經1200-1500rpm離心3min，棄上清，收集細胞沉淀②；
4、吸取5ml新鮮完全培養(yǎng)基，重懸細胞沉淀①、細胞沉淀②，把①、②混勻；
5、用吸管輕輕吹打混勻、分散細胞，按實驗需求接種于實驗器皿內（按實驗需求），然后補充適量新鮮的完全培養(yǎng)基，置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)；
6、待細胞狀態(tài)穩(wěn)定后，用于實驗；可以每2-3天換液一次新鮮的完全培養(yǎng)基。
7、普諾賽建議您收貨后一周內做實驗，避免細胞培養(yǎng)時間過長影響狀態(tài)以及后續(xù)試驗結果。
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