細胞學堂 | RPMI8226培養(yǎng)易被忽視的問題

RPMI8226是1966年從一名61歲男性漿細胞瘤患者的外周血中分離出的B淋巴細胞，它們可用于免疫學和免疫系統(tǒng)疾病的研究。該細胞系是合適的轉染宿主。

基礎信息

形態(tài)特征

與其他由外周血白細胞發(fā)展而來的細胞系相似，該細胞亦表現(xiàn)出淋巴母細胞形態(tài)特征。該細胞系未見典型的成熟漿細胞，但有未成熟漿細胞，胞漿染色較深。掃描電鏡照片顯示，幾乎所有細胞內部都有一層圍繞細胞排列的腫脹的內質網。這在其他細胞系中未曾出現(xiàn)，這些結構特征類似于發(fā)展中的漿細胞。該細胞培養(yǎng)物中未發(fā)現(xiàn)白細胞病毒。

基因表達

該細胞僅表達游離形式的人類免疫球蛋白λ型輕鏈。

特點

目前，學界暫沒有證據表明，RPMI8226細胞能產生重鏈(細胞質型或分泌型)。

病毒易感性

人脊髓灰質炎病毒、單純皰疹病毒、痘苗病毒、水泡性口炎病毒等，都是RPMI8226細胞容易感染的。

細胞培養(yǎng)

1、細胞培養(yǎng)條件

RPMI-1640(PM150110)＋10%FBS(164210-500)＋1% P/S(PB180120)。

2、生長特性

細胞主要以懸浮的單細胞形式生長，部分細胞可能貼壁生長（有時可達50%）；

細胞大小不均一。

3、倍增時間

60小時(PubMed=25984343); 33.5小時(NCI-DTP); 60-70小時 (DSMZ)。

4、傳代方式

建議傳代密度為3-5×10^5個活細胞/mL；生長密度不超過2-3×10^6個活細胞/mL。

可通過補液、離心或更換新鮮培養(yǎng)基的形式培養(yǎng)此細胞，細胞傳代培養(yǎng)密度控制在5×10^5-2×10^6活細胞/mL為佳。換液頻率建議2-3次/周。

5、凍存和復蘇

凍存密度：推薦凍存密度1×10^6 個活細胞/mL。

凍存條件：55%基礎培養(yǎng)基+40%血清+5%DMSO；液氮保存。

RPMI8226生長圖片

注意事項

1、嚴格控制傳代密度，密度過低或者過大都容易造成細胞死亡；

2、密度低的時候，盡量少動少離心，以減少對細胞的傷害；

3、狀態(tài)不好時可補加2mM谷氨酰胺；

4、在培養(yǎng)過程中會出現(xiàn)細胞碎片過多的情況，可以用低速離心去除，一般為800r/min，（由于低速離心會損失部分細胞，故此操作不適合細胞密度過低時使用）；

5、凍存復蘇時保證接種密度，復蘇后維持培養(yǎng)環(huán)境的穩(wěn)定，一般24h后再觀察細胞狀態(tài)。

溫馨提醒：

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